熒光原位雜交FISH(fluorescence in situ hybridization)技術(shù)是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù)。它的基本原理是：如果待檢測的細胞或組織切片上的靶核酸與所用的核酸探針是同源互補的，二者經(jīng)變性-退火-復(fù)性，即可形成靶核酸與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素或直接標記熒光素，可利用該報告分子與熒光素標記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng)或直接經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待測核酸(mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA)進行定性、半定量或相對定位分析的一種實驗方法。

免疫熒光(IF)：以熒光物質(zhì)標記抗體而進行抗原定位的技術(shù)。用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質(zhì)結(jié)合，用于檢測或定位抗體。

應(yīng)用：通過原位雜交及免疫熒光雙染，可以在組織細胞中對核酸分子和蛋白指標同時進行共定位、以及定性分析，可以用來從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。

需要客戶提供：

組織：固定（10%中性甲醛、4%多聚甲醛）組織樣本，常溫運輸；

細胞：新鮮活細胞樣本（大于106）樣本，常溫運輸；

切片：石蠟切片，常溫運輸；冰凍切片以及細胞爬片，涂片-20℃運輸；

實驗信息：基因名稱及ID；

實驗材料：適用于免疫熒光的一抗，原裝抗體不低于20ul；

簡要實驗步驟：

實驗注意事項：

1、 mRNA為檢測對象時，需嚴格要求實驗環(huán)境經(jīng)無RNA酶處理；

2、FISH切片保存時間較短，應(yīng)盡快取圖；

3、不同的抗體與原位雜交進行雙標時，可能會有影響，必要時進行一定的實驗步驟調(diào)整，以避免相互之間的影響。

那這么好的實驗方法怎么會沒有文章支撐呢，特意找到一篇提供給大家進行參考~

RNA雙染(IF/FISH)文獻：Optimized RNA ISH, RNA FISH and protein-RNA double labeling (IF/FISH) in Drosophila ovaries

文獻中提供的實驗流程：

IF-FISH檢測結(jié)果圖