原位雜交與免疫熒光原理：原位雜交是指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。免疫熒光就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體或抗原上，與其相應的抗原或抗體結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。

　　通過原位雜交雙探針及免疫熒光進行三標，可以在組織細胞中對核酸分子和蛋白指標同時進行共定位、以及定性分析，可以用來從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。

實驗結果展示：

實驗流程：

　　石蠟切片熒光探針原位雜交雙探針與免疫熒光三染實驗步驟

　　1. 組織固定、脫水、切片、石蠟切片脫蠟至水;

　　2. 消化：切片于修復液中煮沸10-15分鐘，滴加蛋白酶K消化;

　　3. 預雜交：滴加預雜交液，37°C孵育1h。

　　4. 雜交：傾去預雜交液，滴加含探針probe1+probe2 雜交液, 濃度 ，恒溫箱 度雜交過夜。

　　5. 雜交后洗滌：SSC洗滌;

　　6. 孵育一抗、二抗：滴加一抗，4℃過夜，后PBS洗3×5min;滴加相應二抗，室溫孵育50min，PBS洗3×5min;

　　7. DAPI復染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min;

　　8. 鏡檢拍照;

送樣運輸要求：

　　冰切。標本放原位雜交固定液中，常溫運輸;冰凍切片-20°運輸。

　　石蠟。標本放原位雜交固定液中，常溫運輸;石蠟切片常溫運輸。

　　細胞爬片。細胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，密封，4度運輸。共聚焦皿

　　新鮮組織：組織取出后可以立即冷凍處理，后干冰運輸到武漢進行后續冰凍切片處理。新鮮組織-80°保存