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1、爬片前期處理:
①爬片固定:在孔中滴加3ml固定液,固定15min。吸凈孔中固定液,純水水洗3次(每次水洗的時候用尖頭鑷子挑起爬片清洗,然后用吸管吸凈純水,β半乳糖染色使用專用的固定液。)
②爬片破膜:在孔中滴加3ml破膜液,破膜15min。吸凈孔中破膜液,純水水洗3次(每次水洗的時候用尖頭鑷子挑起爬片清洗,純水不吸出,留著后續使用)
(針對六孔板,其它孔板滴加適量的固定液和破膜液。)
2、爬片染色:
后續染色步驟同石蠟切片相同,染色時間適當延長,清洗或者更換染液使用巴氏吸管吸凈之前的染液。
3、爬片封片:
加入適量酒精或水(看染色過程中最后一步是使用水還是酒精)后挑起爬片,爬片靠在孔邊緣,吸凈酒精后放置于65℃烤箱烘干15min。(染色過程中注意細胞爬片的方向,保證細胞面朝上和染液充分接觸)
從烤箱中取出裝有爬片孔板,在載玻片上寫下每個孔板的編號,在載玻片上滴加一滴中性樹膠后,用鑷子夾起對應編號的爬片,細胞面朝下封片。(封片過程中注意細胞爬片的方向,保證細胞面朝下封片)
二、其他細胞種類的涂片制備:
1.取細胞懸液,2800r 4℃離心5min,棄上清液,根據底部沉淀的細胞量加入2ml甲醇固定。若肉眼看不見細胞沉淀時,用3000r/min,4℃離心10min
2.取用甲醇重懸的細胞懸液,2800r 25℃離心5min,棄上清液,根據底部沉淀加入PBS:
①若肉眼看不見細胞沉淀時,用3000r/min,25℃離心10min,依然無沉淀時,留取底部約0.2ml的液體,再加入0.5ml的PBS混勻后用移液槍吸取200ul,滴于提前用組化筆畫好的小圓圈中(3cmX2cm的橢圓);
②若細胞沉淀量很少,綠豆大小時,棄上清,留取底部沉淀,加入0.5mlPBS,用移液槍吹打混勻后,吸取200ul,涂于提前用組化筆畫好的小圓圈中(3cmX2cm的橢圓);
③若細胞沉淀量很多,黃豆大小或更大時,棄上清,留取底部沉淀,加入2mlPBS,用移液槍吹打混勻后,吸取150ul,涂于提前用組化筆畫好的大圓圈中(最大長邊約5cm,最大短邊約2cm的橢圓),在顯微鏡下觀察細胞量的多少,若還是過厚,再用PBS對倍稀釋該細胞懸液,直至在顯微鏡下觀察到細胞量涂布均勻。
3.用槍將細胞懸液鋪滿整個圓圈,涂片放置自然晾干。







